技术简介：

双分子荧光互补（BiFC）是一种直观、快速地判断目的蛋白在细胞中相互作用和定位的技术。GFP两个β片层之间的loop结构上有可以插入外源蛋白而不影响GFP荧光活性的位点，BiFC技术利用该特性将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白连接形成融合蛋白。当两个目的蛋白发生特异性相互作用时，两个荧光蛋白片段在空间上相互靠近并互补，从而重新组装成完整的具有荧光活性的蛋白，该荧光信号可通过荧光显微镜直接观察。若蛋白间无相互作用，则无法产生荧光。原理图如下：

应用范围：

1、可在植物体内检测蛋白之间有无相互作用及定位；

2、可用于研究蛋白之间的弱相互作用；

3、可用于研究蛋白之间瞬间相互作用的强度和位置变化。

公司优势：

1、本司有多种用于BiFC的荧光表达载体，可用于植物稳定和原生质体瞬时转化(表1)；

2、本司有多种定位蛋白Marker，并已在不同单双子叶植物中验证(表2)；

3、本司长期种植水稻、烟草、拟南芥等幼苗，实验周期短；

4、不同转化系统阴阳性对照，排除背景干扰、信号微弱等技术问题，确保检测灵敏度与准确性；

5、本司可根据老师要求安排不同植物种植，并进行BiFC检测。

服务流程：

咨询下单—确定实验信息—载体构建—植物转化—激光共聚焦显微镜拍照—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

互作蛋白检测组与Marker共定位显微图片(附送阴阳性对照组)；

发表级别的组图。

送样要求：

植物组织需要活体寄送；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例（以水稻原生质体、烟草叶肉细胞、拟南芥原生质体为例）：

结果初析：目的蛋白A和B分别融合YFP荧光标签的C端和N端序列，并与带CFP/mCherry的细胞结构定位Marker共转细胞，最终判断目的蛋白之间的互作关系及位置。