技术简介：

转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—binding domain，BD)和转录激活结构域(activation domain，AD)组成。基于此，酵母单双杂交系统将目的物种的基因构建至pGADT7质粒中，从而形成文库用于后续互作蛋白或者结合启动子的筛选。Gateway 重组技术是由 Invitrogen开发并用于构建酵母文库，其原理是利用细菌噬菌体 λ 的重组系统，将特异性的重组序列加到 DNA 片段的两端并实现不同载体间的转移。酵母双杂交原理是Gal4 转录因子的 DNA 结合域和转录激活域可以分开表达，当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子活性。把目的蛋白分别与 BD和AD 融合表达，当目的蛋白发生互作时，融合的BD和AD 蛋白相互靠近而表现出完整的转录因子功能，从而激活下游基因的表达。酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展而来的一种研究蛋白-DNA相互作用的工具。原理图如下：

应用范围：

1、筛选与目的蛋白互作的未知蛋白；

2、筛选结合目的启动子的未知蛋白。

公司优势：

1、自研不同植物及多糖多酚RNA提取试剂盒，保证RNA高提取量及完整性；

2、高质量的mRNA纯化技术，保证后续高库容（1*10⁷次方）；

3、Gateway构建方法，确保文库基因均一化，且无冗余；

4、文库构建过程无PCR过程确保平均插入片段超过1kb。

服务流程：

建库：咨询下单—植物材料寄送—文库构建—质检—结果交付；

筛库：诱饵确认—载体构建—文库筛选-结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

建库产品：1、初次级文库甘油菌各 4 ml；2、初次级文库质粒各200 μg；

筛库：50个阳性克隆的PCR测序，超过50个克隆部分为40元/克隆测序；

建库和筛库过程的图片（单反拍照）。

送样要求：

建库实验组织样本需要干冰寄送，且质量不少于10g；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例（以水稻核文库构建为例）：

结果初析：水稻叶片RNA提取后电泳检测（A），显示RNA的28S和18S条带清晰，说明样品总RNA的浓度较高且完整性良好，可用于后续mRNA纯化。mRNA提取纯化后电泳检测（B），显示mRNA呈现弥散的条带并集中在500-2000bp处，说明mRNA无降解，可用于后续文库片段的制备。初级文库质粒制备后转化大肠杆菌并涂板用于库容计算（C），显示库容约4.5×106cfu/mL，说明文库基本确保了样本中表达信息(mRNA)的完整性。初级和次级文库插入片段大小检测（D，E），显示文库插入片段阳性率超过95%并且插入片段均超过750bp。次级文库质粒制备后转化大肠杆菌并涂板用于库容计算（F），显示库容约7.5×106cfu/mL。