技术简介：

GST Pull-down实验是验证活性蛋白直接互作的体外实验技术，常作为体内蛋白互作检测后的补充手段。其基本原理是基于谷胱甘肽-S-转移酶蛋白(GST ，glutathione-S-transferase)可以与谷胱甘肽(Glutathione，GSH)结合，将GSH固定于琼脂糖珠上，形成的GSH-琼脂糖珠可以作为与目的蛋白亲和的支撑物。目的蛋白X与GST形成的融合蛋白作为“诱饵蛋白”，若环境中存在与X蛋白互作的蛋白Y，则会形成“琼脂糖珠-GSH-GST-X-Y”复合物。经过洗涤去除杂蛋白后，使用还原型谷胱甘肽洗脱复合物，结合 Western blot 或质谱技术，即可验证两个目的蛋白间的相互作用。原理图如下：

应用范围：

1、检测两个蛋白质间的直接作用关系；

2、筛选与特定蛋白直接结合的未知蛋白群体。

公司优势：

1、本司有多种用于原核表达的载体骨架和促融标签，提高活性蛋白表达成功率；

2、使用多种原核表达菌株进行表达，提高蛋白表达量；    

 服务流程：

咨询下单—确定实验—载体构建—原核表达及蛋白纯化—pull down和WB检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

目的蛋白纯化考染图；

pull down检测WB图片；

发表级别的组图。

送样要求：

如提供蛋白：纯化蛋白各100ul，浓度大于0.5mg/ml，WB检测图；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例：

结果初析：目的蛋白A和B分别融合His和GST标签，原核表达后进行蛋白pull down及WB检测。左图中蛋白之间存在互作，右图中蛋白不存在互作。其中，GST抗体检测结果显示input样本出现目的条带说明存在目的蛋白B，IP下来的产物中也有明显的目的条带，说明pull down成功。His抗体检测结果显示input样本出现目的条带说明存在目的蛋白A，对GST pull down下来的产物检测显示有条带出现则说明二者有互作，反之，则没有蛋白互作。