技术简介：

凝胶电泳迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA)又叫凝胶阻滞实验，是一种研究蛋白质与核酸序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。在竞争实验中，合成含有标记物的DNA或RNA探针，当核酸探针与蛋白样本混合孵育时，样本中的蛋白质与探针会形成蛋白-核酸复合物，这种复合物由于分子量大，在进行PAGE电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的探针则迁移较快，从而可以通过观察条带的大小来判断蛋白与核酸的结合情况。原理图如下：

应用范围：

1、检测启动子中与目的蛋白结合的顺式作用元件；

2、检测与蛋白结合的RNA序列。

公司优势：

1、使用含促融标签的蛋白表达载体，确保表达出可溶性蛋白；

2、使用荧光标记探针，增加检测灵敏度；

3、增加阴阳性对照组，保证实验结果可靠性。

服务流程：

咨询下单—实验信息确认—探针标记和蛋白表达—EMSA检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

蛋白表达考染图、WB检测图、EMSA检测图。

送样要求：

如提供蛋白：纯化蛋白100ul，浓度大于0.5mg/ml，WB检测图；

探针序列，如无探针序列，请提供相关文献；

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例（以GST标签蛋白为例）：

结果初析：目的转录因子与荧光探针结合作用EMSA检测。结果显示，仅加入探针而没有加入蛋白的1号孔和加了GST标签蛋白的2号孔没有出现滞留的结合条带，这两组为阴性对照。在加入目的蛋白TF时，随着探针浓度的增加结合条带逐渐增强(3-5号孔)，而在加入竞争性探针后，随着竞争性探针浓度增高，结合条带逐渐减弱(6-8号孔)，说明目的蛋白和探针结合是特异性的。将竞争性探针换成突变探针后，结合条带又增强了（9号孔），说明突变后的竞争性探针失去了蛋白结合活性，进一步说明TF蛋白与探针结合是特异性的。