技术简介：

酵母三杂交系统是由酵母双杂交技术改进而来，该系统引进了pBridge 质粒，其主要特点是能够同时插入两个外源蛋白。其中，MCS1 插入蛋白的 N 端融合了Gal4 系统中的 BD 结合结构域，MCS2 中插入的蛋白不融合任何标签且上游为 Pmet25 启动子，在甲硫氨酸 (Met) 缺乏的时候该启动子才能工作，促使下游蛋白基因表达。基于此，酵母三杂交验证时将诱饵蛋白插入至MCS1中，第三蛋白插入至MCS2中，猎物蛋白构建至pGADT7载体上。转化酵母菌株后，可以在缺陷型培养基上进行筛选，相较于双杂交的区别是筛选的缺陷型培养基必须是在甲硫氨酸缺陷型的基础上配置。三杂交主要研究第三个成分对两个蛋白互作关系的影响，包括促进、抑制或无影响，其中第三个成分可以是蛋白、RNA或小分子，用于研究蛋白-蛋白、RNA-蛋白和小分子-蛋白相互作用。原理图如下：

应用范围：

1、检测三个蛋白间的相互作用模式；

2、检测蛋白复合物的作用机制和功能。

公司优势：

1、诱饵蛋白自激活检测，消除蛋白自激活影响；

2、互作检测组克隆不同梯度稀释，可直观观察互作强弱；

3、本司具有多种互作检测方法，可验证酵母杂交结果。

服务流程：

咨询下单—实验信息确认—载体构建—自激活和点对点检测—结果交付。

结果交付：

标准实验报告，包括实验步骤与结果；

互作检测酵母梯度稀释点板图（单反拍照）。

送样要求：

载体需要新鲜或甘油菌液体积大于0.5 ml，冰袋运输；

质粒 DNA 体积大于20 μl，浓度不低于30ng/μl,，且主带明显无降解；

提供测序结果以及抗性；

如需我司构建载体，要求详见载体构建。

本司服务案例：

结果初析：所有共转pBridge和pGADT7质粒的AH109酵母菌在二缺培养基上都长出了克隆，说明共转化成功。将二缺培养基上的克隆挑取至四缺培养基中显示，A+ B和A-C+ B共转化酵母菌可以在四缺中生长，说明A蛋白和B蛋白存在互作，当加入3-AT时克隆仍正常生长，说明A蛋白和 B蛋白互作强度较高。在将酵母克隆转移至甲硫氨酸缺陷培养基（Met）后，C蛋白被诱导表达。此时，A-C+B共转化实验组克隆生长速度明显减缓，而A+B实验组仍正常长出克隆，实验结果说明诱导出来的C蛋白抑制了A蛋白和B蛋白之间的互作。